Bepotastine은 H1 히스타민 수용체에 길항작용이 있는 항히스타민제로서, 재채기, 가려움증, 분비물 증가를 효과적으로 감소시켜 알레르기비염치료제로 쓰인다. 본 연구의 목적은 LC-MS/MS를 이용하여 비글견 혈장에서 bepotastine의 농도를 측정하는 분석법을 개발하고, validation을 통해 분석법의 타당성을 검증하는 것이다.
시료 50 μL에 10 μL의 내부표준물질인 diphenhydramine을 첨가한 후 950 μL의 0.1 % formic acid을 포함한 methanol를 첨가하여 단백질침전법으로 전처리하였다. 원심분리 후 얻어진 100 μL의 상등액은 500 μL의 50 % methanol로 희석하여 LC-MS/MS로 분석하였다.
Run time은 2 min이었고, 이동상은 0.1% formic acid를 첨가한 10 mM ammonium acetate와 acetonitrile을 55:45로 혼합한 용액을 사용하였다. 크로마토그래피 분석은 Waters Atlantis® dC18 컬럼(2.1⨉100 mm, 5 μm)을 사용하여 0.4 mL/min의 유속으로 수행하였다. 분석물질의 검출은 positive mode에서 MRM (multiple reaction monitoring) 방법을 사용하였으며, bepotastine 및 diphenhydramine의 mass transition은 각각 m/z 389.2>202.0 및 256.6>167.0이었다.
Bepotastine의 정량한계는 5 ng/mL이었고, 5-1000 ng/mL의 농도 범위에서 우수한 직선성(r=0.9996)을 보였다. 일내 정확성은 101.5-105.0 %(LLOQ 110.0 %), 정밀성은 8.6 %(LLOQ 6.5 %)이하였으며, 3일간 수행한 일간 정확성은 101.0-102.0 %(LLOQ 107.2 %), 정밀성은 7.9%(LLOQ 7.3 %)이하였다.
6마리의 비글견을 대상으로 bepotastine besilate 10 mg 정제를 투여한 후 24시간까지 8 points에서 채혈하고, 개발된 분석법을 이용하여 약물동태학적 파라미터를 산출하였다.
본 연구를 통하여 LC-MS/MS를 이용한 신속하고 정확한 bepotastine의 분석법이 개발되었고. 확립된 분석법은 bepotastine의 약물동태 연구에 적용하기에 충분한 감도와 선택성, 직선성, 정확성 및 정밀성을 갖고 있음이 검증되었다.
