주폐포자충 폐렴 진단키트 개발 및 분석적 성능

Abstract

주폐포자충 폐렴(PCP)은 일반적으로 HIV/AIDS 환자에서 발생하며, 약 70-80%의 환_x000D_ <br>자가 주폐포자충(Pneumocystis jirovecii) 폐렴에 감염되는 것으로 보고되고 있다. 객담_x000D_ <br>과 폐포세척액 등의 검체로부터 주폐포자충(P.jirovecii) 핵산을 검출하는 중합효소연쇄_x000D_ <br>반응(polymerase chain reaction, PCR) 검사 방법이 널리 사용되고 있으며, 민감도와_x000D_ <br>특이도가 높은 특징이 있다._x000D_ <br>본 연구는 실시간 중합효소연쇄반응(Real-time PCR)기반의 제품으로 타겟 유전자_x000D_ <br>mtLSU를 표적으로 주폐포자충(P.jirovecii) 고유의 유전자와 Internal Control로서_x000D_ <br>human RNase P gene의 증폭 유무를 판단하여 정성 검출하도록 자체적으로 프라이머_x000D_ <br>및 프로브를 설계하여 NextGene™ P.jirovecii Detection Kit를 개발하고, 인실리코 분석_x000D_ <br>을 수행하였다. 또한, 분석적 성능을 평가하기 위하여 분석적 민감도, 분석적 특이도(교_x000D_ <br>차반응, 간섭반응, Carry-over), 분석적 정밀도 시험을 진행하였다. 인실리코 분석 결과,_x000D_ <br>제품의 프라이머와 프로브는 P.jirovecii를 특이적으로 검출하는데 적합한 것으로 확인_x000D_ <br>하였으며 제품의 최소검출한계 농도를 결정하기 위해 10가지 농도(4,000 ~ 7.8_x000D_ <br>copies/mL)의 샘플 농도에서 24번 반복 실험한 결과, 최소 검출 한계는 500 copies/mL_x000D_ <br>로 결정되었고, 교차반응이 예상되는 유사한 호흡기 감염 미생물(바이러스, 박테리아_x000D_ <br>등) 46종과 관련 간섭반응 물질 11종에 대한 영향을 확인한 결과 교차반응과 간섭반응_x000D_ <br>이 없음을 확인하였다. 또한, 키트의 Carry-over 오염에 대한 영향을 확인하기 위해 고_x000D_ <br>농도 표준물질(10,000X LoD)과 음성 검체를 번갈아 반복 실험을 진행한 결과,_x000D_ <br>Carry-over 영향이 없음을 확인하였고, 정밀도를 확인하기 위해 반복성 및 재현성 평_x000D_ <br>가를 수행한 결과 본 제품은 검사 내, 검사 간, 날짜 간의 반복성과 장소 간, 실험자_x000D_ <br>간, 로트 간의 재현성을 나타내어 정밀도가 확인되었다. 결론적으로, NextGene™_x000D_ <br>P.jirovecii Detection Kit를 개발하여 분석적 성능을 평가한 결과 본 키트가 P.jirovecii_x000D_ <br>유전자를 효율적이고 신뢰성 있게 검출하는 데 사용될 수 있음을 입증한다.