김문석 노광재 2016-02 21965 https://aurora.ajou.ac.kr/handle/2018.oak/18793 학위논문(석사)--아주대학교 공학대학원 :화학생명공학과,2016. 2 현대 사회에서 비만의 큰 원인은 많은 양의 설탕이 들어가는 음식이 원인이다 그와 동시에 선진국에서 Life- Style과 밀접한 관련이 있는 질병이라 불리우는 비만, 당뇨, 심혈관 장애 같은 질병도 같이 확산되는 현상을 보였다. 이는 고칼로리의 음식 및 과다 섭취에 기인하여 엄청난 증가추세를 보이고 있다. 이에 타우마틴은 Sweet-tasting 을 내는 단백질로서 저칼로리에 설탕을 대체할 천연 물질로서 주목을 받고 있다. 타우마틴은 서부 아프리카의 열대 다우림 지대에 자생하는 다년생 식물인 Thaumatococcus Daniellii의 과실 중에 포함되어 있는 단백질이다. 207개의 아미노산으로 구성된 분자량 약 22kDa 으로 자당보다 2000~3000배 정도 단맛을 내고 저칼로리의 물질로서 다이어트 식품 및 고지혈증 이나 당뇨병 환자들을 대상으로 좋은 대체 물질이 될 것이다. 이에 본 연구에서는 타우마틴에 대한 HPLC-ELSD 와 HPLC-UVD 를 이용하여 신속한 동시 분석법을 개발 하였다. ELSD 와 UVD 의 공통 분석 조건으로는 Cosmosil Protein-R (4.6 mm x 150mm) 컬럼을 사용하였고, 아세토니트릴과 0.1% TFA를 이용하여 유량 1.0mL/Min 으로 기울기 용리시켰다. 또한 Injection volume 20μL, 컬럼오븐 온도 40 °C 가 최적의 조건임을 확인 하였다. ELSD 의 경우 Gas 압력 52 -54 Psi 로 분사 되게 설정 하였고, Drift Tube의 온도는 60˚C 로 설정하였다. Carrier Gas는 99% 초고순도 질소를 사용했다. 이러한 분석방법으로 L.O.D, L.O.Q, 직선성, 정밀성, 정확성 에 대한 파라미터의 신뢰성을 확보 하였고, HPLC-ELSD와 HPLC-UVD에 대한 정량적인 분석방법이 적합함을 확인하였다. I. 서론 1 II. 실험방법 3 1 .재료 및 실험방법 3 1.1. 시약 및 재료 3 1.2. 검액 의 조제 3 1.3. UV/VIS Spectrophotometer를 이용한 분석조건 설정 3 1.4. HPLC/DAD를 이용한 분석조건 설정 7 1.5. HPLC/UVD 분석조건 14 1.6. HPLC/ELSD 분석조건 17 1.7. 분석법 검증 (Validation) 17 1.7.1. 검출한계, 정량한계 (LOD , LOQ) 17 1.7.2. 직선성 (Linearity) 18 1.7.3. 정확성 (Accuracy) 18 1.7.4. 정밀성 (Precision) 18 1.7.5. 반복 주입성 (Repeatability) 19 1.7.6. 완건성 (Robustness) 19 III. 결과 및 고찰 20 1. 분석법의 최적화 20 2. HPLC/UVD 의 분석법 확립 20 2.1. 분석법의 검증 (Validation) 20 2.1.1. 검출한계, 정량한계 (LOD,LOQ) 21 2.1.2. 직선성 (Linearity) 21 2.1.3. 정확성 (Accuracy) 21 2.1.4. 정밀성 (Precision) 22 2.1.5. 반복 주입성 (Repeatability) 22 2.1.6. 완건성 (Robustness) 22 3. HPLC/ELSD 의 분석법 확립 36 3.1. 분석법의 검증 (Validation) 36 3.1.1. 검출한계와 정량한계 (LOD , LOQ) 36 3.1.2. 직선성 (Linearity) 36 3.1.3. 정확성 (Accuracy) 37 3.1.4. 정밀성 (Precision) 37 3.1.5. 반복 주입성 (Repeatability) 37 3.1.6. 완건성 (Robustness) 38 IV. 결론 49 V. 참고 문헌 51 kor The Graduate School, Ajou University 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다. HPLC/UVD 와 HPLC/ELSD를 이용한 Thaumatin의 정량적 동시분석법 개발 Development of analytical methods for simultaneous determination of Thaumatin using HPLC/UVD and HPLC/ELSD Thesis 아주대학교 공학대학원 공학대학원 화학생명공학과 2016. 2 Master http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000021965 HPLC UVD HPLC ELSD 분석법 Life-Style related diseases such as diabetes, high blood pressure, obesity, Hyperlipidemia , and metabolic syndrome have raised important problems in developed countries. These might be linked to staggering increases in the incidences of being overweight and obesity attributable to excessive intake of high-calorie foods. Therefore, low-calorie sugar substitutes can be used in beverages, foods, and medicines. Sweet-tasting proteins have a potential as low-calorie sugar substitutes. Thaumatin is the most potently sweet tasting protein isolated from the arils of Thaumatococcus daniellii, a plant native to tropical West Africa. Thaumatin is a single polypeptide chain protein of 207 amino acid residues with eight disulfide bonds and the molecular mass of protein is 22 kDa. Thaumatin is nearly 2000~3000 times sweeter than sucrose on a molar basis and non caloric And, for that reason, Medicines or food additives Product expected to be used in the diet and diabetes. Also, We studied a rapid and reliable HPLC-ELSD and HPLC-UVD method for the simultaneous determination of Thaumatin from Thaumatococcus daniellii was developed and validated. ELSD and UVD are commonly, The analytes were injected into a Cosmosil Protein-R (4.6 mm x 150mm) column with gradient elution composed of acetonitrile and 0.1% T.F.A at a flow rate of 1.0 mL/min and the injection Volume was 20μL. The column oven temperature was maintained at 40 °C. The evaporative light scattering detector was operated at an evaporating temperature of 60 °C and the optimum flow pressure of nebulizing gas (Nitrogen, 99%-High purity) at 52-54 Psi. These methods were fully validated with respect to the linearity, accuracy, precision, repeatability, L.O.D, L.O.Q. The results indicated that the established HPLC-ELSD and HPLC-UVD methods are Suitable for the quantitative analysis of Thaumatin.