권명희 노주호 2014-02 16301 https://aurora.ajou.ac.kr/handle/2018.oak/18362 학위논문(석사)--아주대학교 일반대학원 :의생명학과,2014. 2 자가면역 마우스 (MRL-lpr/lpr)에서 유래한 3D8 단일가닥 가변부위 (single-chain variable fragment: scFv)는 세포 내 침투능력과 DNA/RNA 가수분해능력을 가진 촉매성 항-핵산 항체이다. 이전 연구에서 마우스 3D8 scFv를 세포에 처리하고 RNA-게놈 바이러스를 감염시켰을 때 바이러스의 복제가 억제되는 것이 관찰 되었다. 이러한 항-바이러스 활성은 마우스 3D8 scFv의 가수분해능력 때문으로 알려져 있다. 마우스 3D8 scFv의 항-바이러스 활성을 닭에게 적용하기 위해 본 연구에서는 CDR (complementarity -determining regions)-이식 전략을 이용하여 닭화 3D8 scFv 항체 (chickenized 3D8 scFv antibody)를 제작하고자하였다. 이를 위하여 수용성이 높다고 알려진 닭 항체 뼈대 (Framework regions, FRs)에 마우스 3D8 scFv의 6 개 CDRs을 옮김으로써 7 가지 닭화 3D8 scFv (CK1-7)를 구축하였다. 이들 닭화 3D8 scFv 단백질을 대장균에서 발현 및 정제하여, 기존 마우스 3D8 scFv의 DNA-결합능력과 DNA-가수분해능력 및 세포 내 침투능력을 유지하는지 조사하였다. 그 결과 닭화 3D8 scFv 항체 중 하나인 CK6가 마우스 3D8 scFv의 모든 활성을 동일하게 유지하는 것을 관찰하였다. 본 연구는 3D8의 본래 활성을 그대로 유지하면서 닭에게 적용할 수 있는 새로운 닭화 항체 제조의 가능성을 제시한다. 차 례 국문요약 ⅰ 차례 ⅱ 그림 차례 ⅳ 표 차례 ⅵ Ⅰ. 서론 1 II. 재료 및 방법 6 A. 대장균에서 닭화 3D8 scFv 항체 발현 및 정제 6 B. 전기영동법 (SDS-PAGE) 시행 6 C. 면역효소흡착법 (ELISA) 7 D. 공초점 현미경 분석 7 E. 유세포 분석 (flow cytrometry) 8 F. FRET-based DNA-hydrolysis assay 9 G. 면역원성 (immunogenicity) 조사 9 1. m3D8 scFv와 닭화 3D8 scFv의 면역 및 채혈 9 2. Protein A tag을 제거한 m3D8 scFv와 CK6 정제 10 3. 혈청에서 면역원성 분석을 위한 ELISA 11 III. 결과 13 A. 닭화 3D8 scFv 발현벡터 제작 13 B. 박테리아에서 닭화 3D8 scFv 항체의 발현 및 정제 16 C. 닭화 3D8 scFv의 DNA 결합 능력 확인 18 D. 닭화 3D8 scFv의 세포 내 유입능력 20 E. 닭화 3D8 scFv의 핵산가수분해 능력 23 F. 닭화 3D8 scFv의 특징 요약 23 G. 닭화 3D8 scFv의 면역원성 26 IV. 고찰 32 V. 결론 34 참고문헌 35 ABSTRACT 40 kor The Graduate School, Ajou University 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다. 마우스 유래 항-DNA 단클론 항체로 부터 CDR-이식방법을 통한 닭화 3D8 scFv 항체 제조 Jooho Roh Thesis 아주대학교 일반대학원 Jooho Roh 일반대학원 의생명과학과 2014. 2 Master http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000016301 닭화 3D8 scFv 항체 CDR-이식