이위교 박일중 2006-08 1530 https://aurora.ajou.ac.kr/handle/2018.oak/16358 학위논문(박사)--아주대학교 일반대학원 :의학과,2006. 8 목적: 장구균의 vancomycin 내성의 표현형은 VanA, VanB, VanC, VanD, VanE 및 VanG의 6가지형이 있으며, 이중 VanA와 VanB형이 임상적으로 의미가 있다. VanA형은 vancomycin과 teicoplanin에 내성을 나타내며, VanB형은 vancomycin에는 내성이나 teicoplanin에는 감수성을 보인다. 그러나, 최근 vancomycin에는 내성이나 teicoplanin에는 감수성인 vanA형 vancomycin 내성 장구균(Vancomycin-resistant enterococc, VRE)의 사례가 일본, 중국 및 한국에서 보고되었으며, 이의 기전은 vanS 도메인의 3점 돌연변이, vanX, vanY 및 vanZ 유전자의 변이로 보고되었다. 본 연구에서는 국내에서 분리된 VanB 표현형 vanA VRE의 유전자 분석을 통하여 한국에서의 발현 기전을 확인하고자 하였다. 재료 및 방법: 전국 8개 대학병원에서 분리된 표현형 VanB vancomycin 내성 장구균 39균주를 대상으로 하였다. E-test 및 한천희석법을 이용하여 최저발육저지농도를 측정하고 중합효소연쇄반응법(PCR)으로 내성유전자형을 확인하였으며, overlapping PCR과 DNA sequencer(Perkin-Elmer, Norwalk, CT)를 이용하여 내성유전자의 구조와 염기서열을 분석하였다. 대상 균주의 유전적 연관성은 pulsed-field gel electrophoresis를 시행 후 Bio-Gene software를 이용하여 분석하였다. 결과: 총 39균주 모두 Enterococcus faecium이었고, 이중 28균주가 VanB 표현형 vanA VRE로 확인되었으며, 그 28균주 모두 vanS 도메인의 유전자 변형은 없었다. 28균주의 VanB 표현형 vanA VRE중 26균주에서 vanY유전자의 결실이 관찰되었고, 이 중 13균주에서 vanZ 유전자의 결실이 동반되었다. 결론: 국내서 발생하는 VanB 표현형 vanA VRE의 발생 기전은 일본 및 중국과는 달리 vanS 도메인의 3점 돌연변이에 의한 것이 아닌 vanX, vanY 및 vanZ의 결실로 인한 것임을 알 수 있었다. 국문요약 ---------------------------------------- i 차례 ---------------------------------------- iii 그림차례 ---------------------------------------- v 표차례 ---------------------------------------- vi Ⅰ. 서론 ---------------------------------------- 1 Ⅱ. 연구대상 및 방법 ----------------------------- 4 A. 대상 균주 ------------------ 4 B. 최저발육저지농도 ------------------ 5 1. E-test ------------------ 5 2. 한천희석법 ------- 5 C. 내성유전자형 결정 ------------------ 6 D. 유전적 형별 분석 ------------------ 8 E. 유전자 구조 분석 ------------------ 9 F. 유전자 염기서열 분석 ------- 13 Ⅲ. 결과 ---------------------------------------- 14 A. 대상 균주 ------------------ 14 B. 최저발육저지농도 ------------------ 15 C. 내성유전자형 결정 ------------------ 17 D. 유전적 형별 분석 ------------------ 18 E. 유전자 구조 분석(vanS 도메인) ------- 20 F. 유전자 구조 분석(transposon typing)--- 21 1. PCR mapping ------------------ 21 2. 염기서열 분석 ------------------ 23 3. 병원에 따른 유전자 변이 특성 ------- 29 4. 유전자 변이와 teicoplanin 감수성 비교-- 31 Ⅳ. 고찰 ---------------------------------------- 33 Ⅴ. 결론 ---------------------------------------- 38 참고문헌 ---------------------------------------- 39 영문요약 ---------------------------------------- 46 kor The Graduate School, Ajou University 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다. Teicoplanin 감수성인 vanA형 반코마이신 내성 장구균의 발현 기전 Il Joong Park Thesis 아주대학교 일반대학원 Il Joong Park 일반대학원 의학과 2006. 8 Master http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000001530 VanB 표현형 vanA VRE Tn1546 IS1216V IS1542 vanX vanY vanZ