서창희 이상원 2019--2 28454 https://aurora.ajou.ac.kr/handle/2018.oak/14924 학위논문(석사)--아주대학교 일반대학원 :의생명과학과,2019. 2 전신홍반루푸스(systemic lupus erythematosus, 이하 루푸스)는 유전적 또는 호르몬, 환경적인 요인으로 인해 항핵항체 등 다양한 자가항체를 생산함으로 발생하는 만성 염증성 자가 면역 질환이다. 20-40세 정도의 여성에게 많이 발병하며 남녀 비는 1:10으로 여성이 상대적으로 많다. 지금까지의 연구에 의하면 유전적, 환경적 요인 외에 여러 가지 요인들이 발병에 영향을 미치지만 루푸스의 정확한 원인은 아직 잘 알려져 있지 않다. 루푸스는 다양한 임상적 증상을 종합하여 진단을 내린다. 루푸스의 좀 더 명확한 진단을 위해 루푸스 환자들의 혈청(n=10)을 21K 단백질칩 분석 방법을 이용하여 정상 대조군(n=5)과 비교하여 자가항체들을 확인하였으며, 비교 분석한 결과 63개의 루푸스 특이 자가항체들을 발굴하였다. 흥미롭게도, 그 중 TCP1에 대한 항체는 대부분의 루푸스 환자 샘플에서 정상 대조군보다 매우 높게 발현되었고 추가적으로 TCP1에 대한 항체가 루푸스에서 특이적으로 발현되는지 확인하기 위해 GST-TCP1 단백질을 제작하여 루푸스 환자(n=100)와 정상 대조군 (n=50), 자가면역질환인 류마티스관절염 환자(n=25), 전신경화증 환자(n=30)과 베체트병 환자(n=15)의 혈청을 이용해 Dot blot 분석하여 비교한 결과 루푸스에서 100명중 79명이 검출되는 것을 확인하였고, 정상 대조군과 다른 자가면역질환과 비교하여 매우 높게 발현되는 것을 확인하였다. 통계분석을 통해 루푸스에 대한 TCP1 항체의 민감도 79%, 특이도 90%를 확인하였다. 따라서, TCP1 항체가 루푸스의 특이적 생체지표가 될 수 있는 가능성을 가지고 있으며, 루푸스의 진단에 있어 새로운 지표가 될 수 있을 것으로 기대된다. Ⅰ 서론 1 Ⅱ 연구대상 및 방법 3 A. 대상 환자군과 정상 대조군의 선별 및 샘플 채취 3 1. 정상 대조군과 환자군 3 2. 전신홍반루푸스 환자군의 임상 자료 수집 3 3. 전신홍반루푸스 환자군과 정상 대조군으로부터의 채혈 및 보관 3 B. 전신홍반루푸스 자가항체 탐색 4 1. Protein microarray 4 C. 전신홍반루푸스 자가항체인 TCP1에 대한 항원 제작 5 1. 중합효소연쇄반응을 통한 유전자 증폭 5 2. TA cloning을 이용한 TCP1이 포함된 Entry벡터 제작 5 3. LR cloning을 이용한 GST-TCP1 plasmid 제작 6 4. Baculovirus를 생산하는 TCP1 유전자가 포함된 Bacmid 제작 7 5. GST-융합 단백질 생산 8 D. Dot-blotting assay 10 E. 통계분석 11 Ⅲ 결과 12 A. 21K 단백질칩을 이용한 전신홍반루푸스 자가항체 표본 선별 12 B. GST-융합 단백질 제작 15 C. 전신홍반루푸스 환자 혈청에서 TCP1 항체의 특이적 발현 검증 17 D. Dot blot을 이용한 정상 대조군 혈청에서 TCP1 항체의 발현 검증 21 E. 여러 자가면역질환 환자의 혈청에서 TCP1 항체의 발현 검증 23 Ⅳ 고찰 28 Ⅴ 결론 31 참고문헌 32 ABSTRACT 35 kor The Graduate School, Ajou University 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다. 전신홍반루푸스 환자의 혈청을 이용한 특이적 생체지표인 TCP1 발굴 Lee Sang Won Thesis 아주대학교 일반대학원 Lee Sang Won 일반대학원 의생명과학과 2019. 2 Master I804:41038-000000028454 http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/common/orgView/000000028454