백승훈 김상은 2015-02 19539 https://aurora.ajou.ac.kr/handle/2018.oak/12941 학위논문(석사)--아주대학교 일반대학원 :약학,2015. 2 췌장암 세포의 일종인 PANC-1은 폐암이나 대장암 같은 다른 종류의 암세포들에 비하여 영양결핍 (Nutrient deprivation)에 대한 내성을 가지는 것으로 알려져 왔다. 또한 최근에 Mexican propolis에서 분리 된 플라보노이드는 영양결핍 배양액 (nutrient deprived media, NDM) 조건에서 PANC-1 세포에 대하여 강한 항암 효과를 나타내는 것으로 보고되었다. 본 연구에서 우리는 PANC-1 세포가 영양결핍조건에서 살아남는데 필요한 생존 전략을 연구하고, 전합성된 플라보노이드 및 그 유도체들의 영양결핍 조건에서 PANC-1 세포에 대한 항암 효과를 평가하는 것을 목표로 하였다. PANC-1 세포는 영양결핍 조건에서 autophagy와 lysosome의 활성도가 증가하였으며, autophagy와 lysosomal cathepsin 억제제는 영양결핍 조건에서 PANC-1 세포의 사멸을 촉진시켰다. 이와 같은 결과는 autophagy와 lysosome 활성화가 영양결핍 조건에서 PANC-1 세포의 생존에 매우 중요한 생존 기전임을 뒷받침한다 할 수 있었다. 같은 조건에서 합성 플라보노이드의 항췌장암 효과를 비교하였으며, 4종의 유도체에서 강한 항췌장암 효과를 확인하였다. 또한, 일부 유도체는 cathepsin의 활성화를 강하게 저해하는 것으로 확인되었다. 이러한 연구 결과는 플라보노이드 성분이 lysosome의 cathepsin을 억제하여 PANC-1 세포의 영양결핍 조건에서 내성을 억제하여 사멸을 유도하였음을 보여준다 할 수 있다. 종양의 중심부에서 영양결핍 조건은 빈번하게 발생되며, 이러한 조건에서 autophagy와 lysosome의 활성화는 열악한 미세환경에서 종양세포의 생존에 기여할 수 있다. 따라서, 영양결핍 환경에서 autophagy와 lysosome의 활성화를 억제하는 화합물은 췌장암 치료를 위한 새로운 전략이 될 수 있을 것이다. 목 차 국 문 초 록 ⅰ 목 차 ⅱ List of Figures ⅳ List of Tables ⅴ List of Abbreviations ⅵ I. 서론 1 1. 연구배경 1 1-1. 췌장암의 정의와 일반적 특징 1 1-2. 췌장암의 치료방법과 문제점 1 1-3. 프로폴리스에서 추출된 항 췌장암 효과 플라보노이드 2 1-4. 종양 미세환경의 정의와 항암제 개발 모델로서의 의의 3 2. 연구목적 5 Ⅱ. 실험 6 1. 시약 및 기구 6 2. 기기 7 3. 암세포주 및 세포배양 8 4. 영양결핍 조건에서 세포생존율 측정법 (MTT cell viability assay) 9 5. 핵 염색 기법을 이용한 세포 사멸율 측정법 (Cell death assay) 9 6. Western blotting 10 7. Transfection 11 8. Imaging (fluorescence / confocal microscopy) 12 9. Cathepsin activity assay 12 10. 합성 플라보노이드의 항췌장암 활성 검색 13 11. 자료의 통계적 처리법 13 III. 결과 14 1. 영양결핍 조건에서 PANC-1 세포의 생존 기전에 대한 연구 14 1-1. 영양결핍에 대한 PANC-1의 저항성 14 1-2. 영양결핍에 의한 PANC-1 세포 미토콘드리아의 탈분극 (mitochondrial depolarization) 17 1-3. 영양결핍에 의한 PANC-1 세포의 autophagy 활성화 20 1-4. 영양결핍에 의한 PANC-1 세포의 라이소좀 및 cathepsin 황성화 23 1-5. 영양결핍 조건에서 autophagy 활성화를 통한 PANC-1 세포의 생존 27 1-6. 영양결핍 조건에서 cathepsin 활성화를 통한 PANC-1 세포의 생존 30 2. 플라보노이드의 항췌장암 활성과 작용기전 32 2-1. 합성 플라보노이드와 유도체들의 영양 결핍 조건에서 항 췌장암 활성 검색 32 2-2. 활성 플라보노이드의 작용기전 39 IV. 결론 50 V. 참고문헌 53 Abstract 55 kor The Graduate School, Ajou University 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다. 합성 Flavonoid의 항췌장암 효과에 관한 연구 Thesis 아주대학교 일반대학원 일반대학원 약학 2015. 2 Master http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000019539 항췌장암