The Activators of Dendritic Cells - PERRY AYN MAYSON MAZA (The Graduate School, Ajou University, 2022)
수지상 세포의 활성화제 수지상 세포는 전문적인 항원 제시 세포이며, naive T 림프구의 효과적인 활성화제이다. 그들은 선천적 면역과 적응적 면역 사이의 연결고리 역할을 한다. DC 하위 집합의 개체 발생과 기능은 다양하며 종양 관련 항원(TAA)을 잠재적으로 수용하고 처리하는 것으로 입증되었다. 이러한 맥락에서 과학자들은 DC 및 T 세포 priming의 활성화를 촉진할 수 있는 면역 억제 DC 기능을 차단하기 위해 유전자 변형 또는 TAA pulsed DC 백신 및 면역 자극 보조제 같은 기술을 고안했다. 따라서, 생체 적용을 위해 보조제와 항원을 결합하려는 관심이 증가되고 있다. 비장 수지상 세포(sDC)가 분리되어 세포 배양에 투입될 때 자발적으로 활성화되는 현상은 주목받고 있다. 새롭게 분리된 sDC는 미성숙하고, 낮은 MHC와 공동 자극 분자를 가지고 있다. 그러나 비장 수지상세포의 자발적 활성화는 배양 3시간 안에 일어난다. 가장 중요한 부분은 대부분의 성숙 인자의 상향 조절이 세포-세포 상호작용에 의해 일어난다는 것이다. 이는 수용성 ICAM-1을 흘려 보내어CD86, CD80, CD40, MHCI, MHCI와 같은 성숙 표면 분자의 상향 조절을 증가시킨다. 또한 피브로넥틴, 특히 피드로넥틴의 세포 결합 도메인은 세포 생존에 영향을 주지 않고 세포 응집과 활성화를 억제한다. 하지만 라미닌은 그 역할을 하지 못한다. 이 연구결과는 암 면역요법 연구에 1차 비장 수지상 세포를 사용할 수 있음을 기대한다. 세포 외 기질(ECM)는 세포의 생존, 분화, 이동을 형성하는 데 중요한 역할을 한다. ECM과 DC는 미세 조정된 동적 교환에서 협력하며, 이는 이후 정상 상태의 조직 상주DC 또는 염증 자극된DC 사이의 항상성에 영향을 미친다. DC가 어떻게 항상성을 유지하는지 설명하는 것이 중요하다. 따라서 피브로넥틴(FN) 및 라미닌(LMN) 단백질과 같은 ECM 단백질이 골수 유래 DC(BMDC)의 성숙에 영향을 미치는지 여부를 조사했다. 대조군, 라미닌 처리 BMDC 와 비교하여 피브로넥틴이 처리된 BMDC는 용량 의존적인 방법으로 표면 성숙 마커 CD86의 발현을 억제되었다. 또한 LPS 유도 BMDC에서 TNF-α 및 IL-12p40과 같은 염증성 사이토카인의 생성은 LPS 단독과 비교하여 피브로넥틴에 의해 용량 의존적으로 억제되었다. 피브로넥틴은 LPS 자극 DC에서 AKT와 IKKα/β의 인산화를 억제했지만, p38과 ERK 1/2 키나아제는 유의미한 반응을 보이지 않았다. BIO5192(α4β1 저해제) 및 PF-562771(FAK 저해제)과 같은 인테그린 억제제를 사용하였을 때, FN의 억제 활성은 α4β1 인테그린 수용체에 결합하는 것으로 시작하여 phosphorylated AKT 키나아제 탈인산화가 일어났다. LPS 주사 마우스 비장에서 FN의 발현의 감소는 FN이 수지상 세포의 활성화와 이동을 단독으로 조절한다는 것을 증명했다. 이러한 결과는 피브로넥틴과 라미닌 ECM 단백질이 성숙 DC의 표현형 또는 기능 특성에 다른 영향을 미친다는 것을 시사한다. 암 면역요법을 위한 DC 보조제를 찾기 위하여 천연 화합물 Inonotus obliquus로부터 다양한 생물학적 활성을 가진 Inotodiol을 선발하였고, Inotodiol처리에 따른 골수유래 수지상세포(BMDC)의 성숙을 촉진여부와 BMDC의 T세포 활성화 유도 능력을 확인하였다. Inotodiol은 다양한 염증성 사이토카인의 생성에 영향을 미치지 않고 BMDC에서 MHC-I, MHC-II, CD86, CD40을 포함한 표면 성숙 마커들의 발현을 증가시켰다. Inotodiol 처리 BMDC로 활성화된 T 세포는 다른 사이토카인을 생성하지 않고 증식하여 IL-2를 생성한다. 생쥐에 Inotodiol을 주입하면 비장 DC의 성숙과 IL-2 생산이 유도된다. Inotodiol과 Inotodiol 처리된 BMDC의 투여는 생체 내에서 양쪽으로 전이된 CD8+ T 세포의 증식을 유도하였다. The phosphatidylinositol-3-kinase저해제 wortmannin은 Inotodiol에 의한 Akt 인산화 및 CD86 및 MHC-II 발현의 상향 조절을 억제했다. 그러나 Inotodiol 은 IκB 키나아제의 인산화 및 IβB-β의 분해에 영향이 없었고, Inotodiol에 의해 유도된 CD86의 발현 증가는 IβB 키나아제 억제제에 의해 차단되지 않았다. Inotodiol 이 The phosphatidylinositol-3-kinas활성화를 통해 DCs에서 비정형 성숙을 유도하지만 NF-κB를 통해서는 유도되지 않으며, Inotodiol이 처리된 DCs는 T세포 증식과 IL-2 분비를 향상시킨다는 것을 시사한다. 이를 바탕으로 수지상 세포의 성숙, 피브로넥틴 존재에서의 기능, primary sDC를 암 면역 치료의 플랫폼으로 활용하는 유망한 전략과 관련된 중요한 이론적 문제를 제기한다. 키워드: 골수 유래 수지상 세포, 이노토디올, 피브로넥틴, s-ICAM-1, 비장 수지상 세포
학위논문(박사)--아주대학교 일반대학원 :의생명과학과,2022. 8
Keywords: Bone-marrow-derived Dendritic Cells; Fibronectin; Inotodiol; Spleen Dendritic cells; s-ICAM-1