c-kit을 타깃하는 인간 항체인 2G4의 에피토프 맵핑과 비 특이적인 결합 분석 연구 - 백은지 (The Graduate School, Ajou University, 2021)
c-kit/CD117은 receptor tyrosine kinase (RTK)이며, ligand인 줄기세포 성장인자 (SCF; stem cell factor)의 결합으로 특정 유전자의 발현을 유도하고 세포 분화 및 증식 조절 그리고 하위 신호 전달 경로를 활성화해 종양 발생 및 발달 그리고 재발에 핵심적인 역할을 한다. SCF와 c-kit의 신호 전달 경로는 일부 특정 종양과 밀접한 관계가 있으며 특히 위장관 간질 종양 (GIST; gastrointestinal stromal tumor), 급성 골수성 백혈병 (AML; acute myeloid leukemia), 흑색종 (melanoma)과 같은 암에서 과 발현되어 있다고 알려져 있다. c-kit을 표적화하여 개발된 항체는 예후가 좋지 않은 암종의 치료제로서 가능성을 제기한다. 본 연구실에서는 c-kit을 표적하는 인간 단일 클론 항체인 2G4를 개발하였고, c-kit에 대한 2G4의 결합 친화력 및 특이성을 본 연구에서 분석하였다. Mutant c-kit clone을 사용하여 binding site를 indirect ELISA로 확인했으며, competitive ELSIA를 통해 SCF와 c-kit의 결합에 대한 항체의 억제 효과를 확인했다. 또한, c-kit negative cell lysate를 사용하여 면역 침강법과 Western blot, LC-MS/MS 분석을 진행하였으며 c-kit 외에 세포에서 발현하는 막 단백질에 대한 2G4 항체의 off-target binding이 없음을 확인하였다. 따라서, 본 연구실에서 개발된 2G4 항체는 c-kit에 대한 특이적 결합 능을 가지기 때문에 이후 추가적인 연구개발을 통하여 암에 대한 항체 치료제로서 가능성을 제시한다.
학위논문(석사)--아주대학교 일반대학원 :약학과,2021. 2
Keywords: Antibody; ELISA; Epitope mapping; LC-MS/MS; SCF; c-kit